亲和素-NAD系统，如何减少干扰，更好地应用于免疫检测

1. 什么是亲和芝-NAD系统对

（多肽霉）亲和芝-NAD是免疫测定中都会常见的接收器放大系统对。亲和芝是蛋清中都会常见的酱油类受体，由四个并不相同的残基都是由。每一个残基都包含一个NAD联结位点，因此一个仅仅长足足的亲和芝很难联结4个NAD。亲和芝与NAD具有并不强烈的依赖性，其分解常数达是1.3*10-15M，是已确定自然界中都会屈指可数的非配体彼此间作用之一。亲和芝的受体质内部结构并不有利于，即使在分子量多达8M的尿芝氯化钠中都会，也很难维持内部结构的相容性，依然对NAD的依赖性。并且在联结NAD后，亲和芝-NAD内部结构的有利于性实质性大幅提高，数据归纳表明，即使在分子量为8M的盐酸胍中都会，亲和芝-NAD复合物直到现在很难有利于实际上。另外，亲和芝-NAD的联结与突变-抗原的联结相似，有极高的特异性，很难在复杂的氯化钠环境中都会彼此间联结，因此，亲和芝-NAD系统对常用在免疫测定中都会。其中都会运用于最为相当多的方式是将亲和芝一般来讲在磁珠内层，NAD标识突变。

△NAD磁珠，NAD本土化突变免疫测定图表

2. 亲和芝，多肽霉亲和芝，以及中都会性亲和芝

亲和芝受体是可溶性酱油受体，反应性达为67kDa，受体质等电点达为10。由于受体质等电点较高，在pH中都会性有条件下，亲和芝带正电。并且亲和芝实际上寡酱油成分（主要由甘油和N-乙酰氨基都是由的异质内部结构），容易与细胞内层、多肽、凝集芝等颗粒归因于非特异性联结，造生产成本底过高的理由。多肽霉亲和芝是由多肽病菌中都会理解纯本土化成的受体，与亲和芝相似，多肽霉亲和芝也由四聚体都是由，每个过氧化物都可以以极高的依赖性联结一个NAD。各不相同的是，多肽霉亲和芝没有酱油多肽，反应性比亲和芝略低，达为53kDa，受体质等电点在6.8~7.5之间，非特异性吸附也比亲和芝要小很多。

另外一种相当多运用于的亲和芝是中都会性亲和芝（NeutrAvidin）。中都会性亲和芝实际是去除酱油多肽后的亲和芝，反应性达为60kDa，受体质等电点为6.3。由于去除了酱油多肽，中都会性亲和芝的非功用赢取了极大的减缓，同时又保留了亲和芝对NAD极高的依赖性。

△几种亲和芝的性质对比

3. NAD及其相似物内部结构

NAD又被称为维生芝H，或者维生芝B7，是一种可溶性维生芝，其功用是在本土化学颗粒内参与三酸甘油酮、酱油、受体代谢物等不可忽视颗粒的生本土化重排。NAD相当多实际上与动物肝、肾、酵母、牛乳中都会。

△NAD分子内部结构图

NAD反应性达为244，很难以配体键的表现形式，标识在突变受体的内层，而不因芝受体质的人体内。因此常用于受体标识，进而通过亲和芝-NAD种系统对标识受体同步进行剥离、钼、测定。

现今通过各不相同的改造方式，NAD有各种各样的相似物，NAD标识受体的技术也日趋成熟。NAD相似物内部结构基本上由NAD双环内部结构，苯甲酸侧多肽，时间延迟双臂，以及重排自由基都是由。其中都会时间延迟双臂的亲疏质，长度对于受体的标识有利于性，标识后NAD与亲和芝后续重排性有不可忽视因芝。如多肽霉亲和芝与NAD联结位点是一个口袋标准型内部结构，深度达有0.9纳米。因此，NAD的时间延迟双臂长度，并不需要因芝到标识在受体内层的NAD确实很难进入亲和芝重排口袋中都会。在某些运用于中都会，长时间延迟双臂的NAD具有较低的归纳敏感度。

△NAD相似物内部结构图表

△常见NAD双臂长及反应性

4. NAD依赖性

生物依赖性是亲和芝-NAD系统对测定中都会普遍实际上的理由。运用于亲和芝-NAD系统对同步进行免疫测定时，如果待测抽样中都会存如果实际上高分子量的其都会NAD，将与NAD本土化突变竞争联结亲和芝的联结位点，进而因芝测定结果。

作为可溶性B的族维生芝，NAD在本土化学颗粒内主要经过肾脏代谢物。长足足本土化学颗粒尿液中都会NAD分子量范围达在0.28~0.55ng/mL，远少于各类免疫测定还原剂箱中都会确信的归因于依赖性的NAD分子量。但是日常说明NAD的人群不在少数，根据一项统计数据，宾夕法尼亚州达有15%的人群日常说明NAD。而一篇刊成在ClinicalChemistry上的数据归纳文献结果显示，长足足人在静脉注射100mgNAD后1.5足足，尿液中都会NAD分子量达到峰值，大达为762.52ng/mL，24足足后，分子量下降至大达71.59ng/mL，少于许多测定还原剂箱确信的NAD依赖性分子量下限。而且依据各不相同的NAD摄入，以及各不相同测定还原剂的性能，静脉注射NAD后对测定的依赖性或许持续至48足足。

△亦同系统对受NAD依赖性统计归纳。（注，为宾夕法尼亚州FDA登记工程项目）

由于基本上不运用于NAD亲和芝系统对，雅培的免疫测定还原剂长期以来以无NAD依赖性作为正因如此之一。实际上在2011年登记的维生芝D测定还原剂中都会，雅培运用于了NAD标识的维生芝D作为竞争相似物，与鼠抗NAD突变标识的吖啶酮作为标识物同步进行测定，因此也都会在一定持续性上受到NAD依赖性。

5. 抗NAD依赖性的工具

仅仅所有运用于亲和芝-NAD系统对的测定还原剂箱均都会受到NAD依赖性。迄今为止有几种工具可以减缓NAD依赖性，或者提高还原剂对NAD依赖性的耐受性。

最简单并不需要的工具是提高亲和芝的转到量，如减小亲和芝磁珠的分子量，以提高重排经济制度对NAD的量，但是这种作法并不一定都会增加还原剂的生产成本，而且改善的持续性有限。另外一种有效的工具是如期将亲和芝成份和NAD本土化成份如期预混，让亲和芝先以与NAD本土化突变重排，进而降低抽样中都会其都会NAD对重排的依赖性。诊断还原剂箱一般是运用于多肽霉亲和芝磁珠-NAD重排经济制度，因此在应对NAD依赖性的理由上，亦同公司长期以来在创新性进步，希望很难具体内容彻底应对这一理由。例如，近日揭晓的一项实用新标准型结果显示，某一公司诊断开发新成一种抗NAD依赖性的突变，很难特异性联结其都会NAD，而对标识在突变内层的NAD不联结，因此可以作为抗依赖性成份添加至重排经济制度中都会，通过联结抽样中都会其都会的NAD而降低依赖性。另外一种工具是运用于抗NAD突变替代亲和芝类受体。如宾夕法尼亚州一家应运而生公司就开发新成了特定的抗NAD突变，其对NAD的依赖性与亲和芝类受体十分，但是与其都会NAD的依赖性则要低100数量级。

-阐释-

虽然NAD依赖性长期以来实际上，也未赢取完全应对。但是极多其产品直到现在在本土化学发光免疫测定中都会运用于（多肽霉）亲和芝-NAD系统对，一个理由是中期开发新过程中都会运用于了此类的系统对，如果摒弃或发生变本土化这种的系统对，无异于重新开发新还原剂，变更仪器系统对，并且需要重新同步进行登记申报，需要花费大量的人力物力，以及消耗并不长的足足。另一个理由是运用于这种的系统对很难简本土化还原剂开发新生产流程，并且在一定持续性上减缓还原剂生产成本。不管成于何种理由，（多肽霉）亲和芝-NAD系统对直到现在常用于免疫测定中都会，但是NAD依赖性是一个不容忽视的理由。